信帆生物：引物合成文獻(xiàn)上線

《 LncRNA PSMA3-AS1調(diào)節(jié)miR-186-5p/SOX4軸對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響》

摘要： 目的 探索長鏈非編碼RNA人蛋白酶體α亞基3型的反義RNA1（long non?coding RNA PSMA3?AS1，lncRNA PSMA3?AS1）對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響以及對微小RNA?186?5p（microRNA?186?5p，miR?186?5p）/性別決定區(qū)Y框蛋白4（sex determining region Y box protein 4，SOX4）軸的調(diào)控機制。方法 利用LipofectamineTM 3000試劑將si?PSMA3?AS1及其陰性對照、miR?186?5p inhibitor及其陰性對照分別轉(zhuǎn)染至人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH?SY5Y中，隨機分為Control組（未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒）、si?NC組（轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1陰性對照）、si?PSMA3?AS1組（轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1）、si?PSMA3?AS1+miR?NC組（共轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1和miR?186?5p inhibitor陰性對照）、si?PSMA3?AS1+miR?186?5p inhibitor組（共轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1和miR?186?5p inhibitor）。采用qRT?PCR法檢測各組細(xì)胞中PSMA3?AS1、miR?186?5p和SOX4 mRNA的表達(dá)水平；Western blot檢測各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞中SOX4蛋白的表達(dá)水平。采用CCK?8法、Transwell實驗檢測各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力。采用生物信息學(xué)方法預(yù)測和雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR?186?5p與PSMA3?AS1和SOX4之間的靶向關(guān)系。結(jié)果 相較于Control組和si?NC組，si?PSMA3?AS1組細(xì)胞中的PSMA3?AS1表達(dá)水平、細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均降低（均P<0.001）。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示，PSMA3?AS1能靶向負(fù)調(diào)控miR?186?5p，而miR?186?5p能靶向負(fù)調(diào)控SOX4。敲低PSMA3?AS1后細(xì)胞的miR?186?5p表達(dá)水平升高，而SOX4 mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低（均P<0.001）。回補實驗發(fā)現(xiàn)，相較于si?PSMA3?AS1+miR?NC組，si?PSMA3?AS1+miR?186?5p inhibitor組SOX4 mRNA及蛋白表達(dá)水平、細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均升高（均P<0.001），而miR?186?5p表達(dá)水平降低（P<0.001）。結(jié)論 敲低PSMA3?AS1可能通過調(diào)節(jié)miR?186?5p/SOX4軸抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲行為。

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